单粒子低温电子显微镜 cryogenic electron microscopy (cryo-EM)，可以重建不同构象蛋白质的高分辨率结构。通常，时间分辨冷冻电镜time-resolved cryo-EM (trEM)，可用于解析蛋白质的瞬时功能构象。在时间分辨冷冻电镜trEM中，在限定的延迟时间后，通过在电子显微镜EM网格上，快速玻璃化蛋白质溶液来阻止反应。尽管冷冻电镜Cryo-EM领域，对时间分辨冷冻电镜trEM越来越感兴趣，但制作时间分辨率低于100mstrEM样品，仍然具有挑战性。
近日，比利时 佛朗德生物技术研究院（Vlaams Instituut voor Biotechnologie）Stefania Torino，Rouslan G. Efremov等，在Nature Methods上发文，报道了一种时间分辨低温柱塞cryo-plunger 的设计和实现，将基于液滴的微流体混合器与激光诱导微射流发生器相结合，可实现快速反应启动和低温电磁栅格的插入冻结。该项方法，实现了5ms时间分辨率，并将蛋白质密度图重建为2.1Å分辨率。在GroEL:GroES蛋白复合物解析了复合物形成的动力学，并可视化了GroEL–ATP复合物的推定短周期构象。![]()
Time-resolved cryo-EM using a combination of droplet microfluidics with on-demand jetting.![]()
图1:时间分辨柱塞plunger的设计和特性。
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图2:时间分辨低温活塞plunger的基准。
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图3:GroEL–GroES 复合物时间分辨和稳态数据的三维重建。
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图4: 时间分辨冷冻电镜time-resolved cryogenic electron microscopy，trEM GroEL–GroES重建详情。
Torino, S., Dhurandhar, M., Stroobants, A. et al. Time-resolved cryo-EM using a combination of droplet microfluidics with on-demand jetting. Nat Methods (2023).https://doi.org/10.1038/s41592-023-01967-zhttps://www.nature.com/articles/s41592-023-01967-z声明：仅代表译者个人观点，小编水平有限，如有不当之处，请在下方留言指正！